Проведение процедуры измерения концентрации двухцепочечной ДНК
1. Приготовить мастер-микс на необходимое количество реакций из расчета:
Spectra Q BR dye -1 мкл на 1 реакцию.
Spectra Q BR buffer - 199 мкл на 1 реакцию.
2. Приготовить стандарты в тонкостенных прозрачных пробирках: Standard 1 – 10 мкл первого стандарта разводятся в 190 мкл мастер-микса; Standard 2 – 10 мкл второго стандарта разводятся в 190 мкл мастер-микса.
3. Подготовить образцы: в отдельную тонкостенную прозрачную пробирку вносится 200-Vобр мкл мастер-микса и Vобр мкл анализируемого образца (варьируется от 1 до 10 мкл). Например, при измерении пробы Vобр=2 мкл в пробирку вносится 200-2=198 мкл мастер-микса и 2 мкл измеряемой пробы.
4. Все образцы и стандарты перемешать на вортексе. Сбросить капли со стенок с помощью кратковременного центрифугирования.
5. На флуориметре Qubit выбрать методы «dsDNA».
6. В открывшемся меню выбрать программу «Broad Range».
7. Пред измерением откалибровать прибор, нажав кнопку «Read standards». Поочередно измерить сначала 1-й стандарт, затем 2-й.
8. После замера обоих стандартов нажать кнопку «Run samples». Установить объем образца, в зависимости от того, какой объем образца вносился в пробирку.
9. Последовательно измерить концентрации образцов.
Важно! Стандарты должны храниться при температуре от +2℃ до +8℃. Интеркалятор Spectra Q BR dye может замерзать при хранении от +2℃ до +8℃ и имеет сродство к РНК в 10 раз ниже, чем к ДНК.
вернуться в каталог товаров