ОСНАЩЕНИЕ И УСЛУГИ ДЛЯ НАУЧНЫХ ЛАБОРАТОРИЙ
Telegram
ОСНАЩЕНИЕ И УСЛУГИ ДЛЯ НАУЧНЫХ ЛАБОРАТОРИЙ
+7 (495) 128-82-74
sales@sesana.ru
Пробники реагентов в подарок
Получить

Набор для очистки нуклеиновых кислот из ПЦР-смесей и фрагментов агарозного геля "Amplex"

Raissol
7000,00
р.
КУПИТЬ СЕЙЧАС
Метод очистки нуклеиновых кислот из ПЦР-смесей, фрагментов агарозного геля, основанный на сорбции НК на кремниевой мембране спин-колонки. Специально разработанный связывающий реагент позволяет растворять агарозные гели любого процентного содержания, а оптимальное содержание солей и уровень рН стимулировать сорбцию ДНК на кремниевой мембране

Тип образца: ПЦР-смесь, фрагменты агарозного геля

Состав набора
Инструкция по использованию
Условия хранения
Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для очистки ДНК:
1.    Связывающий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для растворения агарозного геля и сорбции НК на фильтре колонки;
2.    Промывочный буфер – для промывки нуклеиновых кислот от остатков агарозного геля и компонентов реакционных смесей;
3.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
4.    Спин-колонки – для фильтрации реакционной смеси и сорбции НК.

Инструкция по использованию

Проведение процедуры очистки ДНК

Подготовка пробы (гель)
1.    Вырезать участок геля с нужным фрагментом ДНК и поместить его в предварительно взвешенную пробирку, далее взвесить пробирку с пробой и высчитать разницу. Вес геля в мг приравнивается к его объему в мкл (1 мг геля = 1 мкл геля).
2.    В пробирку добавить 3 объема связывающего буфера (от объема геля), но не менее 300 мкл.
3.    Инкубировать смесь в термостате при 55-58℃ до полного растворения геля, периодически перемешивая на вортексе.
Опционально: для фрагментов ДНК менее 500 п.н. после растворения геля внести в реакцию 1 объем изопропанола (от объема геля) и перемешать. Далее перейти к этапу сорбции и промывки.
Подготовка пробы (реакционная смесь)
1.    Если объем РС составляет менее 25 мкл, то необходимо довести его до 50 мкл водой или ТЕ-буфером и принять данный объем за основной. К объему РС добавить 3 объема связывающего буфера, перемешать.
Опционально: для фрагментов ДНК менее 500 п.н. внести в реакцию 2 объема изопропанола (от объема РС). Далее перейти к этапу сорбции и промывки.
Сорбция и промывка НК
1.    Переместить весь объем смеси в спин-колонку.
2.    Центрифугировать в течение 30 секунд при 10-13 тыс. об/мин, удалить фильтрат из собирательной пробирки.
3.    Добавить в спин-колонку 750 мкл промывочного буфера.
4.    Центрифугировать в течение 30 секунд при 10-13 тыс. об/мин, удалить фильтрат из собирательной пробирки.
5.    Центрифугировать спин-колонку в течение минуты при 10-13 тыс. об/мин.
6.    Переместить спин-колонку в новую пробирку 1,5-2 мл. Собирательную пробирку утилизировать.
Элюция НК
1.    Добавить на центр мембраны спин-колонки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Инкубировать в течение 3-10 минут при комнатной температуре.
3.    Центрифугировать в течение 30-60 секунд при 10-13 тыс. об/мин.
4.    Утилизировать спин-колонки.
Опционально: для повышения выхода НК фильтрат можно повторно нанести на мембрану колонки и/или использовать нагретый до 60-70℃ элюирующий буфер.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "Amplex" (pdf)

Скачать полную инструкцию "Amplex" (pdf)

 

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «Amplex» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.

Необходимые материалы и оборудование

  1. УФ-трансиллюминатор;
  2. Скальпель (или любой другой острый предмет, подходящий для вырезки фрагмента из геля);
  3. Изопропанол (в случае очистки малых фрагментов до 500 п.н.);
  4. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
  5. Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  6. Автоматические дозаторы переменного объема на 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
  7. Спин-колонки с собирательными пробирками (присутствуют в комплекте);
  8. Вортекс;
  9. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
  10. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин.
Смотрите также