Набор для выделения нуклеиновых кислот из FFPE блоков "FFPE MAG"

Raissol

16000,00

р.

Выделение ДНК из срезов FFPE-блоков методом сорбции на магнитных частицах - универсальное решение, исключающее вредное влияние токсических компонентов классических методов депарафинизации. Депарафинизация осуществляется нетоксичным нелетучим раствором, который может быть удален для удобства работы и не требует отмывки фиксированной ткани. Специально разработанный лизирующий раствор снимает кросс-линки белок-ДНК без этапа "кипячения", т.е. не требует повышения температур выше 85℃, и, как следствие, не приводит к получению денатурированных образцов ДНК - полученная ДНК пригодна для подготовки библиотек по технологии "ShotGun Sequensing". Как из основных показателей, более 95% образцов проходят порог ПЦР >800bp и в большей степени зависит от качества и метода фиксации самого образца.

Тип образца: FFPE-блоки

Состав набора

Инструкция по использованию

Условия хранения

Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Старт буфер – нетоксичный, нелетучий реагент для депарафинизации;
2.    Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
3.    Связывающий буфер – для сорбции НК на магнитных частицах;
4.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
5.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
6.    Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
7.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
8.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
9.    РНКаза А – для удаления РНК;
10. Магнитные частицы – для сорбции НК.

Инструкция по использованию

Проведение процедуры выделения ДНК

Депарафинизация и лизис

К срезу FFPE-блока добавить 600 мкл старт буфера и 400 мкл лизирующего буфера, перемешать образцы на вортексе.
Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 15 минут до полного растворения парафина, периодически перемешивая образцы.
Центрифугировать образцы в течение 30 секунд, после чего аккуратно удалить большую часть верхней органической фазы. Рекомендуется оставить тонкий слой верхней фазы во избежание потери ткани. Органическая фаза не токсична и не влияет на дальнейшую работу набора.
Добавить к образцам 30 мкл Протеиназы К, перемешать, сбросить капли кратковременным центрифугированием.
Инкубировать образцы при 60℃ не менее 3 часов. Рекомендуется инкубировать образцы в течение ночи для полного лизиса ткани и большего выхода НК.
Центрифугировать образцы при макс. об/мин в течение 3 минут, перенести максимальный объем супернатанта в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Добавить к образцам 5 мкл РНКазы А, аккуратно перемешать, сбросить капли кратковременным центрифугированием.
Инкубировать образцы в течение 15 минут при комнатной температуре.

Сорбция НК

Добавить в пробирки 600 мкл связывающего буфера и 60 мкл магнитных частиц, перемешать.
Инкубировать образцы в течение 5 минут при комнатной температуре, периодически перемешивая.
Сбросить капли кратковременным центрифугированием.
Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно удалить супернатант, не задевая осадок магнитных частиц.

Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 1 минуты, после чего аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2-3.
6.    Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 3.
7.    Повторить пункты 2-3.
8.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате в течение 5-7 минут при 60℃ до полного испарения промывочного буфера 3.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Инкубировать на магнитном штативе в течение 3 минут.
5.    Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.

Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 4 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и более длительное время при температуре -20℃.

Скачать краткую инструкцию "FFPEMAG" (pdf)

Скачать полную инструкцию "FFPEMAG" (pdf)

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «FFPE MAG» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Старт буфер набора «FFPE MAG» хранится при температуре от +20℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Ферменты Протеиназа К и РНКаза А необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев.

Необходимые материалы и оборудование

Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
Магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
Автоматические дозаторы переменного объема на 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
Вортекс;
Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 14 тыс. об/мин.

Смотрите также