Набор для очистки ДНК после бисульфитной конверсии «DeSulf Clean»

В набор включены все необходимые реагенты:
1. Связывающий буфер – для повышения сорбции НК на фильтре колонки;
2. Десульфирующий буфер – для удаления сульфогруппы;
3. Промывочный буфер – для промывки нуклеиновых кислот;
4. Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
5. Спин-колонки – для сорбции НК.

Краткая инструкция «DeSulf Clean» (pdf)

Полная инструкция «DeSulf Clean» (pdf)

Сорбция НК
1. В спин-колонки внести 3 объема связывающего буфера по отношению к объему образца.
2. Добавить весь объем образца после бисульфитной конверсии.
3. Перемешать смесь переворачиванием колонок.
4. Центрифугировать колонки в течение 30 секунд при 10-12 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
Десульфирование и промывка НК
1. Добавить в колонки 200 мкл промывочного буфера.
2. Центрифугировать колонки в течение 30 секунд при 10-12 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
3. Добавить в колонки 200 мкл десульфирующего буфера.
4. Инкубировать колонки при комнатной температуре 20 минут.
5. Центрифугировать колонки в течение 30 секунд при 10-12 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
6. Дважды повторить пункты 1-2.
7. Центрифугировать пустые спин-колонки в течение 1 минуты при 10-12 тыс. об/мин.
8. Перенести спин-колонки в новые пробирки объемом 1,5-2 мл. Собирательные пробирки утилизировать.
Элюция НК
1. Добавить на центр мембраны спин-колонок 22 мкл элюирующего буфера. Инкубировать в течение
5 минут при комнатной температуре.
2. Центрифугировать колонки в течение 1 минуты при 10-12 тыс. об/мин.
3. Утилизировать спин-колонки.
Опционально: для повышения выхода НК необходимо повторно нанести фильтрат на мембрану колонки.
Полученные растворы модифицированных нуклеиновых кислот могут храниться до 2 дней при температуре от +2°C до +4°C и до года при температуре -20°C.

Все реагенты набора «DeSulf Clean» могут храниться при температуре от +4 до +25°C в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.

Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл; штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл; автоматические дозаторы переменного объема на 20- 200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники; cпин колонки с собирательными пробирками (идут в комплекте); вортекс; скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин.