Реагент ExON позволяет осуществить очистку ПЦР-продукта за один шаг и вносится к продукту после окончания процесса амплификации, после чего следуют две инкубации: первая – при температуре 37℃ для расщепления остаточных праймеров и дефосфорилирования нуклеотидов; вторая – при температуре 80℃ для инактивации реагента. Образцы, обработанные реагентом ExON, не требуют дополнительной очистки и готовы к проведению исследований сразу после окончания процесса обработки. При необходимости рекомендуется проводить этап обессоливания продукта для усиления сигнала флуоресценции.
Условия термоциклирования и хранения
Протокол очистки ПЦР-смесей
Условия термоциклирования и хранения
Условия термоциклирования: Температурный оптимум для работы реагента ExON составляет 37℃. Инактивацию реагента следует проводить при температуре 80℃. Хранение: -16℃ – -20℃.
1. Достать реагент ExON из морозильной камеры (-16℃ – -20℃) и поместить в холодный штатив или лед на время процедуры внесения. По окончании работы незамедлительно убрать реагент в морозильную камеру. 2. К 5-10 мкл ПЦР-смеси добавить 2 мкл реагента ExON. Аккуратно перемешать смесь с помощью пипетирования. Примечание: если требуется обработать другой объем ПЦР-смеси, то необходимо пропорционально изменить объем вносимого реагента ExON. 3. Поместить пробирки в амплификатор, установить следующую программу: ПЦР-продукт готов к дальнейшему применению. Обработанные ПЦР-продукты могут храниться при температуре -20℃ до востребования.