В набор включены все необходимые реагенты для выделения тотальной ДНК:
1.    RBC буфер – предназначен для удаления эритроцитов крови;
2.    Лизирующий буфер – на основе лаурилсульфата натрия и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
3.    Осаждающий буфер 1 – для преципитации белков;
4.    Осаждающий буфер 2 – для преципитации НК;
5.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
7.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
8.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса.

Проведение процедуры выделения тотальной ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 300 мкл крови и добавить 900 мкл RBC буфера.
2.    Встряхнуть пробирки на вортексе.
3.    Инкубировать в течение 5-10 минут при комнатной температуре.
4.    Центрифугировать в течение 1 минуты при макс. об/мин (не менее 13 тыс. об/мин для настольных центрифуг), далее удалить супернатант.
5.    К полученному осадку клеток добавить 300 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К, интенсивно встряхнуть на вортексе до полного разрушения конгломерата клеток.
6.    Инкубировать в термостате при 55-60℃ в течение 15-25 минут, периодически встряхивая.
7.    Перенести пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 1 минуты. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут до полного остывания смеси.
Сорбция и осаждение НК
1.    Добавить к смеси 50 мкл осаждающего буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в течение 3-5 минут во льду или в холодном штативе. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
5.    Аккуратно, не задевая осадок, перенести 300-330 мкл супернатанта в новую пробирку объемом 1,5-2 мл.
6.    Добавить 330 мкл осаждающего буфера 2 и перемешать с помощью пятикратного переворачивания пробирки.
7.    Для увеличения выхода ДНК рекомендуется инкубировать пробирки в морозильной камере при    -20℃ в течение 25 минут.
8.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2,3.
6.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 42℃ или в центрифуге-концентраторе при 30℃ до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствуют ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "BloodT" (pdf)

Скачать полную инструкцию "BloodT" (pdf)

 

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «GM Blood T» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Фермент Протеиназа К хранится при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.