ОСНАЩЕНИЕ И УСЛУГИ ДЛЯ НАУЧНЫХ ЛАБОРАТОРИЙ
Telegram
ОСНАЩЕНИЕ И УСЛУГИ ДЛЯ НАУЧНЫХ ЛАБОРАТОРИЙ
+7 (495) 128-82-74
sales@sesana.ru
Пробники реагентов в подарок
Получить

Набор для выделения ДНК из плазмы крови Cf Extra

Raissol
11000,00
р.
КУПИТЬ СЕЙЧАС
Метод выделения свободноциркулирующей ДНК из больших объемов плазмы (4,5 мл), основанный на разрушении связей белок-ДНК, с последующей сорбцией нуклеиновых кислот на магнитном сорбенте. Специально разработанный связывающий раствор повышает сорбцию коротких фрагментов ДНК на кремниевом носителе, и минимизирует кросс-связывание белков (полипептидов) с носителем, в чем заключается основная сложность экстракции НК из плазмы крови.

Тип образца: Плазма крови

Состав набора
Инструкция по использованию
Условия хранения
Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Связывающий буфер – для сорбции НК на магнитных частицах;
3.    Ресуспендирующий буфер – для разрушения конгломерата частиц;
4.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
8.    Магнитные частицы – для сорбции НК.

Инструкция по использованию

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 15 мл поместить 4,5 мл плазмы крови.
2.    Добавить 900 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
3.    Перемешать пробирки с помощью переворачивания.
4.    Инкубировать пробирки на водяной бане при 56-60℃ в течение 60-90 минут, перемешивая каждые 10-20 минут.
5.    Перенести пробирки на лед и инкубировать в течение 2-3 минут. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 10-15 минут до полного остывания пробирок.
Сорбция НК
1.    Добавить к смеси 9,6 мл связывающего буфера и 130 мкл магнитных частиц, хорошо перемешать.
2.    Инкубировать пробирки при комнатной температуре в течение 30 минут, перемешивая каждые 5-10 минут, либо установить на вращающийся ротор с минимальной скоростью.
Ресуспендирование
1.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при макс. об/мин, после чего удалить супернатант.
2.    Добавить к каждому осадку 850 мкл ресуспендирующего буфера и разрушить конгломерат частиц с помощью пипетирования.
3.    Перенести суспензию в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
4.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 5 минут.
5.    Аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 900 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 3 минут, после чего аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4.    Повторить пункты 1-3.
5.    Добавить в пробирки 900 мкл промывочного буфера 2.
6.    Повторить пункты 2,3.
7.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ в течение 5 -10 минут либо при комнатной температуре в течение 20 минут до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Инкубировать на магнитном штативе в течение 3 минут.
5.    Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. Показатели полученных растворов ДНК соответствуют диапазону концентраций 0,3-1 нг/мкл при измерении с помощью набора Spectra Q HS (RaissolTM, Россия) на приборе Qubit (Thermo Fisher Scientific, США). Спектр размера устанавливается с помощью электрофореза на приборе Caliper (Perkinelmer, США). Стандартный диапазон 160-200 п.н.

Скачать краткую инструкцию "CFExtra" (pdf)

Скачать полную инструкцию "CFExtra" (pdf)

    

   

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «CF Extra» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Фермент Протеиназа К хранится при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.

Необходимые материалы и оборудование

  1. Пробирки типа фалькон объемом 15 мл;
  2. Штатив для пробирок типа фалькон; микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл; штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  3. Автоматические дозаторы переменного объема на 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
  4. Водяная баня с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 56-65ºС;
  5. центрифуга для пробирок типа фалькон объемом 15 мл; вортекс;
  6. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
  7. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин;
  8. Магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  9. Штатив-охладитель или ледогенератор.
Смотрите также