Подготовка образцов для NGS-секвенирования — этап, влияющий на качество и точность полученных данных. Рассмотрим ключевые шаги, которые необходимы для корректной подготовки материала перед отправкой на секвенирование. Компания Sesana предоставляет комплексные NGS-услуги, включая консультации и наборы реагентов для подготовки.
Основные этапы подготовки образцов
1. Выбор и сбор образцов
Состав и качество биологического материала оказывают влияние на итоговое качество секвенирования. Используют кровь, ткани, культивируемые клетки и другие типы образцов. Рекомендуется применять стерильные инструменты и соблюдать требования к хранению и транспортировке с целью предотвращения деградации нуклеиновых кислот.
2. Изоляция нуклеиновых кислот
Выделение ДНК или РНК — критичный этап. Для этого подбирают подходящий метод с учетом типа материала. Sesana предлагает наборы для выделения ДНК Raissol, обеспечивающие воспроизводимость процесса. Важно использовать качественные реагенты и строго следовать протоколам, чтобы минимизировать примеси и разрушение молекул.
3. Оценка качества и концентрации
После изоляции проводят оценку качества и количества нуклеиновых кислот. Методы спектрофотометрии и флуориметрии позволяют определить концентрацию и выявить возможные загрязнения (например, белками). Концентрация должна соответствовать требованиям выбранного протокола секвенирования.
4. Подготовка NGS-библиотек
Процесс создания библиотек включает фрагментацию ДНК до необходимого размера, лигирование адаптеров и амплификацию. Sesana предлагает наборы для подготовки библиотек, адаптированные под различные типы образцов и платформы секвенирования.
5. Контроль качества библиотек
Перед секвенированием необходимо проверить размер и концентрацию фрагментов библиотеки. Для этого применяют гель-электрофорез или капиллярный электрофорез. Контроль позволяет выявить несоответствия и предотвратить неудачные запуски.
FAQ — часто задаваемые вопросы
Какой объем образца необходим для NGS-секвенирования?
Требования зависят от типа материала и метода выделения. Обычно требуется от 1 до 10 мкг нуклеиновых кислот.
Какие реагенты лучше использовать для изоляции ДНК?
Рекомендуется применять зарекомендовавшие себя наборы, например Raissol от Sesana, которые обеспечивают стабильность и чистоту матриала.
Как избежать деградации образцов во время подготовки?
Для сохранения материала следует соблюдать условия хранения и транспортировки, а также использовать стерильные инструменты и контейнеры.
Дополнительные рекомендации и ресурсы
Подготовка образцов для NGS-секвенирования требует комплексного подхода, учета специфики анализируемого материала и контроля качества на каждом этапе. Для детального ознакомления с возможностями и условиями NGS-сервиса Sesana воспользуйтесь консультацией специалистов.
Перейти на страницу NGS-услуг и запросить консультацию можно по ссылке.