ОСНАЩЕНИЕ И УСЛУГИ ДЛЯ НАУЧНЫХ ЛАБОРАТОРИЙ
Получите пробники реагентов бесплатно
От компании "Сесана"
Отправляя заявку, вы автоматически соглашаетесь на условия политики обработки персональных данных.
Набор для выделения нуклеиновых кислот из FFPE блоков "FFPE MAG"
Raissol
16000,00
р.
Выделение ДНК из срезов FFPE-блоков методом сорбции на магнитных частицах - универсальное решение, исключающее вредное влияние токсических компонентов классических методов депарафинизации. Депарафинизация осуществляется нетоксичным нелетучим раствором, который может быть удален для удобства работы и не требует отмывки фиксированной ткани. Специально разработанный лизирующий раствор снимает кросс-линки белок-ДНК без этапа "кипячения", т.е. не требует повышения температур выше 85℃, и, как следствие, не приводит к получению денатурированных образцов ДНК - полученная ДНК пригодна для подготовки библиотек по технологии "ShotGun Sequensing". Как из основных показателей, более 95% образцов проходят порог ПЦР >800bp и в большей степени зависит от качества и метода фиксации самого образца.
Тип образца: FFPE-блоки
В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1. Старт буфер – нетоксичный, нелетучий реагент для депарафинизации;
2. Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
3. Связывающий буфер – для сорбции НК на магнитных частицах;
4. Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
5. Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
6. Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
7. Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
8. Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
9. РНКаза А – для удаления РНК;
10. Магнитные частицы – для сорбции НК.
1. Старт буфер – нетоксичный, нелетучий реагент для депарафинизации;
2. Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
3. Связывающий буфер – для сорбции НК на магнитных частицах;
4. Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
5. Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
6. Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от солей;
7. Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
8. Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
9. РНКаза А – для удаления РНК;
10. Магнитные частицы – для сорбции НК.
Проведение процедуры выделения ДНК
Депарафинизация и лизис- К срезу FFPE-блока добавить 600 мкл старт буфера и 400 мкл лизирующего буфера, перемешать образцы на вортексе.
- Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 15 минут до полного растворения парафина, периодически перемешивая образцы.
- Центрифугировать образцы в течение 30 секунд, после чего аккуратно удалить большую часть верхней органической фазы. Рекомендуется оставить тонкий слой верхней фазы во избежание потери ткани. Органическая фаза не токсична и не влияет на дальнейшую работу набора.
- Добавить к образцам 30 мкл Протеиназы К, перемешать, сбросить капли кратковременным центрифугированием.
- Инкубировать образцы при 60℃ не менее 3 часов. Рекомендуется инкубировать образцы в течение ночи для полного лизиса ткани и большего выхода НК.
- Центрифугировать образцы при макс. об/мин в течение 3 минут, перенести максимальный объем супернатанта в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
- Добавить к образцам 5 мкл РНКазы А, аккуратно перемешать, сбросить капли кратковременным центрифугированием.
- Инкубировать образцы в течение 15 минут при комнатной температуре.
- Добавить в пробирки 600 мкл связывающего буфера и 60 мкл магнитных частиц, перемешать.
- Инкубировать образцы в течение 5 минут при комнатной температуре, периодически перемешивая.
- Сбросить капли кратковременным центрифугированием.
- Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно удалить супернатант, не задевая осадок магнитных частиц.
1. Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 1.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 1 минуты, после чего аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4. Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 2.
5. Повторить пункты 2-3.
6. Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 3.
7. Повторить пункты 2-3.
8. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате в течение 5-7 минут при 60℃ до полного испарения промывочного буфера 3.
Элюция НК
1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4. Инкубировать на магнитном штативе в течение 3 минут.
5. Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 4 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и более длительное время при температуре -20℃.
Скачать краткую инструкцию "FFPEMAG" (pdf)
Скачать полную инструкцию "FFPEMAG" (pdf)
Буферы набора «FFPE MAG» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Старт буфер набора «FFPE MAG» хранится при температуре от +20℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Ферменты Протеиназа К и РНКаза А необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев.
Старт буфер набора «FFPE MAG» хранится при температуре от +20℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Ферменты Протеиназа К и РНКаза А необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев.
- Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
- Магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
- Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
- Автоматические дозаторы переменного объема на 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
- Вортекс;
- Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
- Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 14 тыс. об/мин.
Смотрите также
Реагенты и оборудование для генетических исследований
© 2023 ООО "Сесана". Политика конфиденциальности и обработки персональных данных соответствует требованиям ФЗ от 27 июля 2006 г. № 152-ФЗ «О персональных данных».
© 2023 ООО "Сесана". Политика конфиденциальности и обработки персональных данных соответствует требованиям ФЗ от 27 июля 2006 г. № 152-ФЗ «О персональных данных».